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Ecco alcuni metodi principali che possono aiutarti a risolvere il problema dell’errore interno di Drupal 500.La colorazione aspecifica è motivata dall’interazione ionica tra l’anticorpo principale o forse un anticorpo secondario con una struttura molecolare, proprio ciò che può portare a un rumore di fondo elevato, in modo che la posizione di espressione dell’essenziale rilevante nel tessuto non possa più essere tracciata .

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Possibili cause	Soluzioni
Come posso correggere l’errore interno 450? Anticorpo primario e secondo impostare gli anticorpi collegati sono compatibili	Come posso correggere l’errore 600 in php? < br> … non fare in modo che stai consumando un anticorpo secondario con il miglior livello elevato di resistenza agli anticorpi primari (solo per illustrare, gli anticorpi primari possono essere elevati mentre nei conigli, utilizzare anti- anticorpi di coniglio). Come posso risolvere i problemi di IHC? Innanzitutto, determina il problema con il tuo tono immunoistochimico dalle seguenti opzioni esatte:Anticorpi essenziali insufficienti:Gli anticorpi primari e secondari potrebbero essere incompatibili:I tessuti beneficiano di:Le cellule sono impermeabili:La deceratura non ti basta: • Assicurati che gli isotipi più importanti e quelli della scuola superiore siano compatibili. Convinciti di consumare anticorpi secondari derivati ​​dagli anticorpi principali. Assicurarsi che questi specifici isotipi importanti e secondari possano essere compatibili. Abbastanza
Nessun anticorpo ha dimostrato di essere legato alla proteina reale	Aggiungi più alto concentrazione anticorpi primari Incubare il campione con l’anticorpo più a lungo (ad es. durante la notte) a 4 ° C.
Anticorpo. Questo potrebbe non essere sempre appropriato per le procedure IHC che ti consentono di individuare la proteina nel suo pensiero nativo	Controlla i dati sugli anticorpi per assicurarti che i nostri anticorpi contro il tipo utilizzando IHC che stai utilizzando sono stati stipulati (ad es. rilegatura formalina / PFA, surgelazione, ecc.). Testare l’anticorpo che appare attraverso il Western blot nativo (non denaturato) per assicurarsi che non sia danneggiato.
Anticorpi o dispositivi di amplificazione potrebbero aver perso la loro attività a causa di una manipolazione impropria della conservazione I.	< li> Leggi le istruzioni per la conservazione dei tuoi prodotti nella scheda tecnica di una persona.	li> Evitare l’eccessiva deglutizione/scongelamento. Esegui controllo perfetto
La proteina di interesse non è solo presente nel tuo tessuto attuale	Inserisci controllo positivo. Consultare la letteratura chirurgica per verificare se la proteina è presente solo in uno specifico tipo di tessuto.
Recentemente, la proteina di interesse ha una frequenza molto elevata	Usa il beneficio del segnale da a aumentare il segnale, ad esempio, la biotina coniugata per essere in grado di un altro anticorpo. Fluoroforo
che (usando il rilevamento della fluorescenza) potrebbe essere danneggiato da un’esposizione troppo chiara	Conservare sempre gli anticorpi secondari coniugati con fluoroforo al buio; troppa luce può eventualmente indirizzare al fotosbiancamento.
Può essere assente la deparaffinazione (se il tessuto è incorporato solo nella paraffina)	Decerare i moduli molto più a lungo e utilizzare xilene fresco.
Il metodo proveniente da tutte le fissazioni (quando si utilizzano fissativi formalina-paraformaldeide) può influenzare la protezione degli epitopi	Utilizzare vari metodi di convalescenza dell’antigene che smascherano l’epitopo (ad es. arbitrato termico con tamponi a pH 6 o 9, enzimatico, ecc.). Ripara le partizioni in meno tempo.
L’anticorpo non è riuscito a entrare nel nucleo cellulare (se la stessa proteina bersaglio è anche una proteina nucleare)	< ul> Aggiungere un tipo di permeabilità forte come Triton X allo schermo di blocco e inoltre al tampone di diluizione dell’anticorpo. Guarda il nostro feed attraverso i metodi di permeazione.
la permeabilità danneggia i filtri cellulari (se la proteina preferita è uno strato di membrana proteica)	< li> Utilizzare un detersivo meno aggressivo (es. Tween 5 invece di Triton X). O semplicemente rimuovere lo stabilizzatore di permeazione da una sorta di tamponi. Vedi il nostro protocollo per metodi di permeazione.
Il tampone può essere contaminato da bacta Per fattore	Aggiungi 0,01 % di azide nel buffer di aiuto per la conservazione degli anticorpi. Utilizzare un tampone sterile nuovo (ad es. PBS più sterile e pulito).

Segui una guida alla risoluzione dei problemi di immunoistochimica per determinare rapidamente il potenziale motivo valido di un problema con il tuo protocollo e verifica le soluzioni.

Innanzitutto, etichetta il problema con la tua straordinaria colorazione immunoistochimica durante l’utilizzo delle opzioni o di seguito:

Basso senza tinta

• Utilizzare una maggiore concentrazione di anticorpi.
• Incubare più a lungo

• Devono essere generati anticorpi aggiuntivi sul tuo attuale anticorpo primario ospite. Per illustrare, in un caso in cui l’anticorpo primario è anti-HSP70 di topo, usa semplicemente l’anticorpo anti-topo secondario (come l’anticorpo di capra anti-topo)
• Anche gli isotipi devono essere compatibili.

• I campioni devono essere ricoperti di liquido durante la colorazione.

• Metanolo e acetone st aumentano le perdite cellulari nella struttura, fissandole
• Quando si utilizza la formaldeide per aumentare la permeabilità del telefono cellulare, utilizzare Triton X-100 allo 0,2%.

• Sezioni di deceratura più lunghe
• Utilizzare sempre l’ultimo xilene.

• Confermare che gli anticorpi IHC sono stati stabiliti, o meglio, di che tipo: formalina, inclusi in paraffina, congelati di recente, ecc.
• Testare l’anticorpo con un meraviglioso Western blotting per assicurarsi che non abbia infiammato la tecnologia dell’informazione.

• Riduci la durata contemporaneamente al commit.
• Utilizzare l’assortimento di tecniche di recupero dell’antigene per scoprire l’epitopo.

• Aumentare il tempo di incubazione della maggior parte degli anticorpi primari che utilizzano il campione.

• I campioni dovrebbero essere spiegati in modo chiaro subito dopo l’elaborazione poiché la qualità di visualizzazione peggiora nel tempo. Se necessario, conserva i vetrini nel misterioso a 4°C.

• I cicli di blocco/sblocco sono dannosi e possono portare a un degrado della qualità superiore. È meglio crearne di più piccoli Nessuna quantità dalle aliquote non appena si sperimenta il prodotto.
• L’anticorpo non è stato conservato correttamente. Sfortunatamente, ciò potrebbe richiedere l’uso di questa fiala per principianti.
• Se l’abutment non deve essere conservato al buio (se si utilizza l’immunofluorescenza da sola), è necessario utilizzare un flacone nuovissimo.

• Condurre un controllo positivo
• Quando la proteina quasi importante è presente ma non abbondante, considera la fase di amplificazione per massimizzare lo spettacolo complessivo.

Sfondo alto

• Messaggi di deceratura più lunghi
• Utilizzare sempre xilene semi-affumicato.

• Quando si utilizza il nostro sistema di rilevamento HRP, anche l’attività della perossidasi endogena e il 3% di H ₂ O _il prima di eseguire il processo di colorazione

• Se il sistema di rilevamento della biotina viene utilizzato in test con elevate concentrazioni di biotina endogena (ad es. rene, organi di carne magra, milza), eseguire il blocco della biotina durante l’incubazione dei campioni di avidina, con e dopo una regolare azione di blocco con la biotina impostata e quindi rimossa del tutto Nessuna incubazione di anticorpi

• Ulteriore diluizione dell’anticorpo primario e/o aggiuntivo.

• Testare gli anticorpi secondari senza utilizzare gli anticorpi più significativi. Se è presente la colorazione, sostituire l’anticorpo del liceo o considerare piuttosto un anticorpo primario coniugato.

• Estendere il difficile periodo di incubazione e considerare la modifica dell’agente limitante.

• Ridurre il tempo di incubazione specifico per l’amplificazione e diluire ulteriormente tutti gli anticorpi supplementari.

• È molto importante lavare assolutamente le aree tra i gradini. Assicurati di seguire le seguenti istruzioni di processo per le fasi di lavaggio

• Prendi in considerazione l’utilizzo di tessuti più sottili poiché la macchia di carne sotto tutto il piano focale rimuoverà le macchie di sfondo non necessarie.

Colorazione non specifica

• Cerca di mitigare la concentrazione specifica e il tempo di incubazione.

Il tessuto primario viene solitamente posizionato all’esterno nello stesso modo in cui viene tinta questa pelle (ad esempio, un topo nel topo):

• Prova Usa un prodotto allevato contro un’altra specie specifica. In caso contrario, prova a bloccare alcune delle IgG endogene dotate del siero di cui sopra come sottoprodotto. Ora puoi anche provare a incubare le sezioni con l’1% di tritone per consentire loro di pulire il tessuto. Oppure usa TBS-Tween 35 come tampone di lavaggio invece di PBS-Tween 20.

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