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Il y a toujours eu quelques méthodes simples qui peuvent vraiment vous aider à résoudre le problème d’erreur interne Drupal 500.La décoloration non spécifique est causée par une interaction ionique entre le seul anticorps ou un anticorps secondaire avec une structure moléculaire fonctionnelle, ce qui peut conduire à un bruit de fond élevé, de sorte que la position d’expression de la protéine pertinente dans le tissu ne peut plus être suivie. .

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Causes possibles	Solutions
Comment corriger l’erreur interne 500 ? Anticorps primaire et plus encore ensemble d’anticorps sont compatibles	Comment puis-je corriger l’erreur 500 en php ? < br> … faire et ne jamais s’assurer de consommer un anticorps alternatif avec un haut niveau de résistance aux anticorps préliminaires (par exemple, les anticorps primaires peuvent être plus élevés chez les lapins, utiliser des anticorps secondaires anti-lapin) . Comment puis-je dépanner et réparer l’IHC ? Tout d’abord, trouvez le problème avec votre couleur immunohistochimique parmi les options suivantes :Anticorps essentiels insuffisants :Les anticorps primaires et secondaires sont incompatibles :Les tissus bénéficient de :Les cellules sont imperméables :Le déparaffinage n’est sans doute pas suffisant : • Assurez-vous que les isotypes les plus puissants et secondaires sont compatibles. Assurez-vous de consommer des anticorps secondaires basés sur des anticorps primaires. Assurez-vous que les types d’isotypes élémentaires et secondaires spécifiques peuvent être similaires. Assez
Aucun anticorps n’est lié à l’acide aminé réel	Ajouter plus de concentration élevée significative anticorps Incuber l’échantillon avec l’anticorps plus longtemps (par exemple, toute la nuit) à 4 °C.
Anticorps. Cela peut ne jamais toujours être approprié pour les procédures IHC qui vous permettent de localiser la protéine dans son état naturel	Vérifiez généralement les données d’anticorps pour vous assurer que nos anticorps correspondent typiquement au type d’IHC que vous utilisez ont été assez confirmés (par exemple, liaison formol / PFA, congélation exceptionnelle, etc.). Testez l’anticorps qui, selon les experts, apparaît dans le Western blot natif (non dénaturé) qui peut s’assurer qu’il n’est pas endommagé.
Les anticorps ou les ressources d’amplification peuvent avoir perdu leur activité en raison d’un stockage et d’une manipulation irréalistes I.	< li> Lire les instructions de stockage de vos modèles dans la fiche technique.	li> Éviter une ingestion/décongélation excessive. Exécuter contrôle positif
La protéine de la conscience n’est pas présente dans vos cellules microscopiques actuelles	Entrez contrôle bénéfique. Consulter la maîtrise littéraire chirurgicale pour voir si la protéine n’est présente qu’à l’heure actuelle dans un type de tissu.
Récemment, la protéine d’intérêt a également une basse fréquence	Utilisez le gain du signal pour augmenter le signal, par exemple la biotine conjuguée à un autre anticorps. Fluorophore
qui (en cas de détection par fluorescence) pourrait être endommagé par une introduction trop légère	Conservez toujours un deuxième ensemble d’anticorps conjugués au fluorophore dans l’obscurité ; trop de lumière pourra éventuellement conduire au photoblanchiment.
Le déparaffinage peut être absent (si tout le tissu est enrobé de paraffine)	Déparaffiner le sections beaucoup plus longues et utiliser du bon xylène.
Les techniques de fixation (lors de l’utilisation de fixateurs formol-paraformaldéhyde) peuvent concerner la protection des épitopes	< li> Utiliser une variété de méthodes de récupération d’antigène qui démasquent l’épitope (par exemple médiation énergétique avec des tampons à pH 6 et pour 9, enzymatique, etc.). Réparez les partitions partout en moins de temps.
L’anticorps n’a pas pu entrer dans le noyau de la cellule (si la protéine cible est aussi une protéine atomique)	Ajouter une perméabilité substantielle telle que le Triton X au tamis filtrant et au tampon de dilution d’anticorps. Voir nos produits alimentaires sur les méthodes de perméation.
la perméabilité endommage les filtres à air des cellules (si la protéine cible est une couche de tissu protéique)	Utilisez un agent de nettoyage moins agressif (par exemple Tween 5 au lieu de la plupart des Triton X). Ou retirez simplement le support de perméation des écouvillons. Voir notre protocole concernant les méthodes de perméation.
Le tampon peut être contaminé qui a bacta By side	Ajouter 0,01 % d’azoture pour aider à tamponner le stockage des anticorps. Utilisez un écouvillon stérile frais (par exemple, la grande majorité du PBS stérile).

Suivez notre guide de dépannage en immunohistochimie pour déterminer rapidement les causes potentielles d’un problème avec votre méthode et afficher les solutions.

Tout d’abord, identifiez le problème avec votre étonnante coloration immunohistochimique à l’aide des options ou ci-dessous :

Basse dépourvue de coloration

• Utilisez une concentration plus élevée impliquant des anticorps.
• Incuber plus longtemps

• Des anticorps supplémentaires doivent être générés contre votre hôte d’anticorps principal actuel. Pour illustrer, si l’anticorps primaire est un anti-HSP70 du bouton de la souris, utilisez un anticorps secondaire anti-souris (comme l’anticorps anti-souris de chèvre)
• Les isotypes doivent également être harmonieux.

• Les échantillons doivent être recouverts de liquide tout au long de la coloration.

• Perméabilité cellule méthanol et acétone st turbocharge, fixation
• Lorsque vous utilisez du formaldéhyde pour augmenter la perméabilité cellulaire, utilisez du Triton X-100 à 0,2 %.

• Sections de déparaffinage plus longues
• Utilisez toujours le xylène le plus récent.

• Confirmez que l’expérience des anticorps IHC a été validée, ou plutôt, quel type de zone formol, inclus en paraffine, frais congelé, etc.
• Testez actuellement l’anticorps avec un excellent transfert Western pour vous assurer que cela n’a pas affecté la technologie de l’information.

• Raccourcir la longueur de en même temps que le commit.
• Utiliser diverses techniques de récupération d’antigènes pour découvrir notre épitope.

• Augmenter le temps d’incubation de la plupart des premiers anticorps avec l’échantillon.

• Les échantillons doivent être illustrés de manière vivante peu de temps après le traitement, car la solution d’affichage se dégrade avec le temps. Si nécessaire, conserver les lames portant le noir à 4°C.

• Les cycles de gel/dégel sont nocifs et peuvent contribuer à la dégradation de la qualité. Il est préférable de fabriquer les plus petites quantités d’aliquotes dès que vous recevez le produit.
• L’anticorps a définitivement été stocké de manière optimale. Malheureusement, cela peut nécessiter l’application d’un flacon pour débutant.
• Si souvent le pilier n’est pas stocké dans l’obscurité (si vous travaillez avec l’immunofluorescence seule), un nouveau flacon doit être appliqué.

• Effectuez un contrôle positif
• Lorsque la protéine la plus importante est présente mais nullement abondante, utilisez l’étape d’amplification pour maximiser une partie du signal global.

Fond élevé

• Sections de déparaffinage plus longues
• Utilisez toujours du xylène semi-fumé.

• Lors de l’utilisation du système de détection HRP, également procédure de peroxydase endogène avec 3 % H ₂ O ₂ avant d’effectuer l’étape de coloration

• Si le système de détection de la biotine est envisagé dans des échantillons avec des concentrations élevées de biotine endogène de mit (par exemple, rein, organe hépatique, rate), effectuer un blocage de la biotine en incubant des échantillons d’avidine, avec et après une étape de blocage principale avec la biotine fixée et ainsi obtenu débarrasser d’abord Pas d’incubation d’anticorps

• Dilution supplémentaire de l’anticorps primaire et/ou éventuellement d’un anticorps secondaire.

• Test des anticorps secondaires sans utiliser d’anticorps primaires. Si une coloration est présente, changez l’anticorps secondaire ou envisagez plutôt un anticorps conjugué le plus vital.

• Prolongez la durée d’incubation difficile et envisagez de changer l’agent limitant.

• Réduisez le temps d’incubation pour l’amplification et diluez davantage tous les anticorps secondaires.

• Il est très avantageux de bien laver les zones entre les foulées. Assurez-vous que vous êtes susceptible de suivre mes instructions de protocole suivantes pour les tâches de lavage

• Envisagez d’utiliser des tissus plus fins, car la crasse de chair sous le plan focal éliminera les taches d’expérience antérieures inutiles.

Coloration non spécifique

• Essayez de réduire la concentration spécifique et l’incubation en second lieu.

Le tissu primaire est désormais généralement usé de la même manière que ce tissu est teint (par exemple, un ordinateur dans une souris) :

• Essayez d’utiliser un produit principal élevé contre une autre classe spécifique. Sinon, essayez de bloquer certaines de leurs IgG endogènes avec le sérum ci-dessus. Vous pouvez même essayer d’incuber les sections en ayant 1 % de triton pour nettoyer les tissus. Ou même utiliser TBS-Tween 20 comme tampon de lavage au lieu de PBS-Tween 20.

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Drupal 500 내부 오류