Estos son algunos métodos simples que pueden ayudar a los compradores a solucionar el problema del error interno de Drupal 500.El amarillamiento inespecífico de los dientes es causado por la interacción iónica entre el anticuerpo principal real o un anticuerpo secundario con la última estructura molecular, lo que puede provocar un alto ruido de experiencia previa, de modo que la posición de expresión de la proteína relevante en el tejido no puede ser más larga. ser rastreado
Causas posibles
Soluciones
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¿Cómo puedo solucionar el error interno 500?
El anticuerpo primario también es el segundo conjunto de anticuerpos son compatibles
¿Cómo solucionaría el error 500 en php?
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… siga, no se asegure de que está consumiendo un segundo anticuerpo con un alto nivel de resistencia a los anticuerpos primarios (por ejemplo, los anticuerpos primarios podrían ser altos en conejos, use anti-anticuerpos secundarios). anticuerpos de conejo).
¿Cómo soluciono problemas de IHC?
Primero, encuentre el problema con todo su tono inmunohistoquímico de las siguientes opciones:Anticuerpos esenciales insuficientes:Los anticuerpos primarios como secundarios son incompatibles:Los tejidos se benefician de:Las células permanecen impermeables:La desparafinación no es suficiente:
• Asegúrese de que los isotipos generalmente importantes y secundarios sean compatibles.
Asegúrese de consumir anticuerpos adicionales derivados de anticuerpos primarios.
Asegúrese de que estos isotipos elementales y secundarios específicos puedan ser compatibles. Suficiente
No hay anticuerpos unidos a la proteína de suero real
Agregue más nivel de contenido alto anticuerpos primarios
Incubar la muestra que tenga anticuerpo durante más tiempo (p. ej., toda la noche) a 4 °C.
Anticuerpo. Es probable que esto no siempre sea apropiado para los procedimientos de IHC con respecto a permitirle ubicar la proteína en el estado nativo de la empresa
Verifique estos datos de anticuerpos para asegurarse de que nuestros anticuerpos con respecto al tipo de IHC que usted están utilizando ahora han sido confirmados (por ejemplo, unión de formalina/PFA, ultracongelación, etc.).
Pruebe cuál es el anticuerpo que aparece en el Western nativo (sin desnaturalizar) desnudo para asegurarse de que no esté dañado.
Es posible que los anticuerpos o los dispositivos de audio hayan perdido su actividad debido a un almacenamiento y manipulación inadecuados I.
Lea las instrucciones para almacenar sus increíbles productos en la hoja de datos.
Siga nuestra guía de solución de problemas de inmunohistoquímica para decidir rápidamente sobre la posible causa de un problema con un nuevo protocolo y ver las soluciones.
En primer lugar, identifique el problema con su sorprendente tinción inmunohistoquímica utilizando las siguientes opciones:
Bajo sin colorear
Use una concentración más alta que tenga que ver con los anticuerpos.
Incubar más tiempo
Se generarán anticuerpos adicionales contra su anticuerpo primario actual de varios tipos. Para ilustrar, si el anticuerpo primario es pc anti-HSP70, use un anticuerpo anti-ratón secundario (como el anticuerpo anti-ratón de cabra)
Los isotipos también deben existir compatibles.
Las muestras deben cubrirse con mucha suavidad durante la tinción.
Metanol y acetona street aumentan la permeabilidad celular, fijando
Cuando utilice productos químicos para aumentar la permeabilidad celular, utilice Triton X-100 al 0,2 %.
Secciones de desparafinado más largas
Utilice siempre nuestro último xileno.
Confirme que los anticuerpos IHC han sido validados, o más bien, qué se reproducen: formalina, incluidos en parafina, frescos congelados, etc.
Pruebe el anticuerpo real con un excelente Western Blot para asegurarse de que no haya afectado la tecnología de la información.
Acortar la duración al mismo tiempo que la confirmación.
Use varias técnicas de recuperación de antígenos para descubrir su epítopo.
Aumente el tiempo de incubación de un gran porcentaje de anticuerpos primarios con la muestra.
Las muestras se ilustrarían vívidamente poco después del procesamiento, ya que la calidad actual se degrada con el tiempo. Si es necesario, guardar escurriendo en la oscuridad a 4°C.
Los ciclos de congelación/descongelación son dañinos y posiblemente pueden conducir a una degradación de la calidad. Es mejor que pueda crear las cantidades más pequeñas de No a partir de alícuotas tan pronto como reciba el producto.
El anticuerpo no debe haberse almacenado de manera óptima. Desafortunadamente, esto puede requerir el uso específico de un vial para principiantes.
Si su pilar no se almacena durante la noche (si se usa solo inmunofluorescencia), se debe usar más un vial nuevo.
Llevar a cabo un control positivo
Cuando la proteína más importante esté presente, recuerde, aunque no sea abundante, utilice el paso de amplificación para fortalecer la señal general.
Fondo alto
Secciones de desparafinado más largas
Utilice siempre xileno semiahumado.
Cuando se utiliza el sistema de detección de HRP, normalmente la actividad de peroxidasa endógena con 3% H b O 2 antes de realizar el proceso de colores marrones o rojizos
Si el sistema de detección de biotina se ha utilizado en muestras con valores elevados de biotina endógena (p. ej., riñón, órgano hepático, bazo), realice la selección de biotina al incubar muestras de avidina, con y después del paso de bloqueo regular con biotina establecida y, por lo tanto, eliminada primero. Sin incubación en anticuerpos
Dilución adicional del anticuerpo primario y para cada anticuerpo secundario.
Realice pruebas de anticuerpos alternativos sin usar anticuerpos primarios. Si se presenta tinción, reemplace el anticuerpo secundario o considere un nuevo anticuerpo primario conjugado en su lugar.
Extienda el período de incubación de un desafío y considere cambiar el agente limitante.
Reduzca el tiempo de incubación para la amplificación y también diluya todos los anticuerpos secundarios.
Es bastante importante lavar bien las áreas entre pasos. Asegúrese de respetar las siguientes instrucciones de protocolo para las escaleras de tijera de lavado
Considere usar telas más delgadas ya que la mancha del mundo real debajo del plano focal eliminará las manchas de fondo innecesarias.
Tinción no específica
Intente reducir la concentración específica y, además, el tiempo de incubación.
Las células solares primarias suelen desgastarse de la misma forma que se tiñe este tejido (por ejemplo, un ratón de confianza en un ratón):
Intente utilizar un producto principal criado contra otra especie muy específica. Si no, intente bloquear algunas de sus IgG endógenas con el suero anterior como un buen subproducto. Incluso puede intentar incubar las partes con 1 % de tritón para limpiar el tejido. O use TBS-Tween 20 como tampón de lavado en lugar de PBS-Tween 20.
¿Qué causa la decoloración de fondo en inmunohistoquímica?
Se cree que la tinción de fondo es el increíble resultado total de la captación de anticuerpos no específicos (Ab) por los receptores Fc endógenos (FcR) o una nueva combinación importante de interacciones iónicas e hidrofóbicas.
